ELISA操作步骤

发布时间： 2019-01-16   

大鼠干扰素-r（IFN-r）定量EIA试剂盒使用说明

原理
本实验采用ABC-HRP方法。用抗大鼠IFN-r单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IFN-r与单抗结合，高灵敏检测样品中IFN-r的含量。 
试剂盒组成
1. 48孔微孔板： 一块
2. 样品稀释液：一瓶 6ml
3. 抗体工作液：一瓶 4ml
4. 酶标抗体工作液： 一瓶 6ml
5. 终止液：一瓶 6ml
6. 洗涤液（25 x）：一瓶 25ml
7. 标准品：一管/二管 用前加样品稀释液250ul溶解，溶解后4度可保存一周
8. 底物液A：一瓶 6ml
9. 底物液B：一瓶 6ml
10. 坐标纸： 一张
11. 封板纸 一张
准备试剂与收集血样
1. 洗涤液：用重蒸水1:25稀释
2. 收集血液标本：采集血清尽早检测，2-8oC保存一天；需更长时间须冷冻（-20 oC）保存，避免反复冻融。
检测程序
1. 建立标准曲线：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100ul，孔加标准品100ul，混匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第六孔，*后，从第六孔中吸出100ul弃去。第七孔为空白对照，第八孔为零孔。
2. 加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul混匀。
3. 将反应板充分混匀后粘上封板纸置37 oC 120分钟。
4. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
5. 每孔（除零孔）加抗体工作液50ul，置37℃ 60分钟。
6. 洗板：同前。
7. 每孔（除零孔）加酶标抗体工作液100ul（两滴），将反应板置37 oC 60分钟。
8. 洗板：同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴，置37 oC避光反应15分钟。
10. 每孔加入1滴终止液混匀。
11. 在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除零孔值后再行计算。
2. 以标准品500、250、125、62.5、31.3、15.6、0 pg/ml之OD值在双对数纸上作图，画出标准曲线。通过标本的OD值可以在标准曲线上查出其浓度。或使用计算机软件，绘制出标准曲线，计算样品含量。
注意事项
1. 以上标准孔及待查样品均建议做复孔，每次测定应同时制作标准曲线。
2. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。有效期6个月。
3. 本试剂盒取出的试剂在室温条件下使用，溶液应轻轻摇匀后使用。
4. 本试剂盒含2M硫酸，不要将它与含叠氮化钠的废物混在一起。
5. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
6. 本试剂盒仅供研究用。