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ELISA试剂盒样本的重要性

ELISA试剂盒样本的重要性

发布时间:2020-05-20

ELISA即酶联免疫吸附法,是一种常用的固相酶免疫测定方法。 由于ELISA方法简单,方便,灵敏,特异性强且不需要特殊设备(只需要酶标仪就可以),所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。

但是影响ELISA测定的因素有很多,而其操作中需要有一定的技术要求,如操作手法,环境,样本等,有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性)等,样本的重要性关系到整个实验的结果,上海极威生物为大家解读ELISA检测的影响因素之一-样本的影响

1、样本的保存:

在冰箱中保存过久的标本,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、会造成假阳性;为避免上述问题,在ELISA试剂盒测定血清标本时zui好能新鲜采集;

如果不能立即测定,根据相应的时间保存相应的温度,5 d内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应-20℃低温冻存;如冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。

2、样本的时间:

因为塑料试管能吸附抗原物质,所以样本长时间放在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。zui好的方法是使用真空采血管;

并使用非抗凝标本,肝素抗凝血浆会增加OD值,EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

3、样本受细菌污染:

因菌体中可能会含有内源性辣根过氧化物酶,因此,被细菌污染的标本同溶血标本一样,可能会产生非特异性显色而干扰测定结果。

4、样本的凝固:

样本凝固不全。在实验中,有的时候心急为了争取时间快速检测,ELISA试剂盒在血液还未开始凝固的时候就强行离心分离血清,导致血清中仍残留部分纤维蛋白原,在ELISA测定过程中形成肉眼可见的纤维蛋白块,易造成假阳性结果;因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

5、样本溶血:

溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)。

ELISA试剂盒在洗涤过程中往往难以完全洗脱,它可使H2O2释放出原生态氧(O),从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质,即显蓝色,产生假阳性[2]。所以严重溶血标本禁用。